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以下是关于植物海藻糖-6-磷酸(T6P)ELISA试剂盒说明书的核心内容整理:
BS-8050 植物海藻糖-6-磷酸(T6P)ELISA试剂盒 必赢线路检测3003
实验原理
采用双抗体夹心法(或一步夹心法)检测T6P浓度:
包被抗体:微孔板预包被T6P特异性抗体。
反应体系:依次加入样本、标准品和HRP标记检测抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。
显色与检测:TMB底物在HRP催化下显色(蓝色→黄色),450nm波长测定OD值,浓度与吸光度正相关。
试剂盒组成
组分 96孔配置(示例) 备注
微孔酶标板 12孔×8条 预包被抗体
标准品 0.3mL×6管 浓度梯度:0-80 μg/L或0-12 ng/mL
HRP检测抗体 6mL(或10mL) 需避光保存
TMB底物(A/B) 各6mL 现配现用
终止液 6mL(2M硫酸) 显色终止
20×洗涤缓冲液 25mL 使用前1:20稀释
样本处理要求
样本类型:植物组织匀浆、细胞上清液等,避免含叠氮钠(HRP抑制剂)。
预处理:1000×g离心20分钟取上清,分装后-20℃保存,避免反复冻融。
操作步骤
平衡试剂:使用前室温平衡20分钟,预冷组分需溶解。
加样与孵育:
标准品孔加入梯度浓度标准品,样本孔加入待测液(建议复孔)。
37℃孵育60分钟,洗板5次(手工或自动洗板机)。
显色与终止:
每孔加入TMB底物,避光反应15分钟。
加入终止液后15分钟内测定OD450值。
注意事项
质量控制:S0标准品作为阴性对照,样本浓度需乘以稀释倍数。
保存条件:未使用板条需密封保存于4℃,试剂盒有效期通常为6个月(2-8℃)。
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