ELISA试剂盒进行各项实验条件的选择

　　ELISA试剂盒进行各项实验条件的选择

以下是ELISA试剂盒实验条件选择的综合指南，必赢线路检测3003结合关键参数与操作规范整理：

一、温度与孵育条件‌

平衡温度‌

试剂盒需室温平衡20-30分钟(避免冷凝水影响浓度)‌

部分HRP标记抗体需即用即取，无需回温‌

孵育温度‌

常规孵育：37℃恒温(±0.5℃误差)‌

特殊需求：4℃过夜孵育(低背景信号)‌

二、pH值与缓冲体系‌

洗涤液配制‌

含0.05% Tween-20的PBS缓冲液(pH 7.4)‌

结晶析出时需37℃加热溶解后稀释‌

样本稀释液‌

推荐pH 7.2-7.6的含蛋白保护剂缓冲液(如1% BSA)‌

三、时间控制‌

关键步骤时间‌

抗原抗体反应：60-90分钟(双抗体夹心法)‌

显色反应：15-20分钟(避光)‌

终止反应‌

终止液加入后需5分钟内读数(避免信号衰减)‌

四、样本处理与稀释‌

样本预处理‌

离心去除沉淀(8000-1000×g 5分钟)‌

高浓度样本需预稀释(避免钩状效应)‌

稀释策略‌

血清/血浆推荐50%稀释‌

组织裂解液需1-2 mg/mL蛋白浓度‌

五、质量控制措施‌

对照设置‌

空白孔(稀释液)+ 标准品梯度孔(R²>0.98)‌

阳性/阴性对照(验证试剂特异性)‌

重复与校准‌

每样本设2-3复孔(批内CV<10%)‌

移液器定期校准(尤其小体积加样)‌

　　注：不同品牌试剂盒参数可能差异较大，建议以说明书为准‌。

注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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