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缓冲溶液的配置及原理有哪些注意事项
以下是缓冲溶液配置及原理的关键注意事项总结,必赢线路检测3003结合技术规范与常见问题解决方案:
一、缓冲溶液选择原则
pKa匹配
缓冲对的pKa值应接近目标pH(理想差值≤1),如PBS缓冲液(pKa2=7.21)适用于pH7.0±0.2。
弱酸/碱浓度比建议1:1(如醋酸-醋酸钠缓冲对pKa=4.75)。
浓度控制
总浓度通常为0.1-0.2M,过高可能影响离子强度,过低则缓冲能力不足。
二、配置操作要点
试剂处理
磷酸盐等试剂需110-130℃烘干2-3小时去除结晶水。
使用电子天平精确称量(<0.1mg)。
溶解与定容
先溶解主盐(如Na₂HPO₄),再调节pH至目标值。
定容后需用pH计校准(如pH6.86标准缓冲液需6.80-7.00)。
pH调节
禁止直接加强酸/碱调节,应通过共轭酸碱比例调整(如用NaOH中和醋酸)。
三、常见问题与解决方案
问题 原因 解决方案
缓冲能力不足 浓度过低或pKa不匹配 重新计算比例或提高总浓度
pH值漂移 挥发组分损失(如NH₃) 密封避光保存,现配现用
沉淀生成 离子浓度超限(如Ca²⁺干扰) 使用去离子水并过滤
四、特殊应用注意事项
HPLC流动相
缓冲液需色谱级超纯水配制,避免颗粒物堵塞系统。
预混合流动相,避免泵内混合不均导致保留时间波动。
生物实验
避免含金属离子(如Mg²⁺)干扰酶活性。
灭菌后需验证pH稳定性(如121℃高压灭菌20分钟)。
注:不同缓冲体系参数可能差异较大,建议以实际实验需求为准。
注:仅供科研使用,以上资料供参考,如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。
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