小鼠单克隆抗体的制备过程

　　小鼠单克隆抗体的制备过程

　　小鼠单克隆抗体制备的核心是通过‌杂交瘤技术‌将免疫小鼠的B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。以下是关键步骤与要点：

　　1. ‌抗原免疫小鼠‌

　　抗原选择‌：需高纯度蛋白(>90%)或偶联载体的小分子抗原(如KLH偶联多肽)‌。

　　佐剂乳化‌：

　　初次免疫‌：抗原与弗氏wanquan佐剂(FCA)乳化(油包水状态)‌。

　　加强免疫‌：后续使用弗氏不wanquan佐剂(FIA)或直接注射抗原‌。

　　免疫方案‌：

　　皮下多点注射(如腋下、腹股沟)，间隔2-4周加强免疫3-5次‌。

　　末次免疫后3-5天检测血清效价(ELISA效价≥1:10,000为合格)‌。

　　2. ‌细胞融合与杂交瘤筛选‌

　　脾细胞制备‌：处死免疫小鼠，无菌取脾，研磨成单细胞悬液‌。

　　融合条件‌：

　　脾细胞与骨髓瘤细胞(如SP2/0)按1:3比例混合，聚乙二醇(PEG)诱导融合‌。

　　HAT培养基筛选‌：

　　未融合的B细胞和骨髓瘤细胞因缺乏HGPRT酶而死亡，仅杂交瘤细胞存活‌。

　　3. ‌杂交瘤克隆化与抗体检测‌

　　有限稀释法‌：将杂交瘤细胞稀释至0.5-1个细胞/孔，培养后筛选单克隆‌。

　　抗体检测‌：

　　ELISA或Western Blot验证抗体特异性与效价‌。

　　阳性克隆扩增后，通过腹水法或体外培养大量生产抗体‌。

　　4. ‌抗体纯化与保存‌

　　粗提‌：硫酸铵沉淀法浓缩腹水或培养上清‌。

　　精细纯化‌：Protein A/G亲和层析或抗原偶联柱纯化‌。

　　保存条件‌：

　　短期：4℃加0.02%NaN₃(1-6个月)‌。

　　长期：-20℃或-80℃分装冻存‌。

　　关键注意事项

　　动物伦理‌：遵循实验动物福利规范，减少免疫与采血痛苦‌。

　　批次差异‌：多克隆抗体易受动物个体差异影响，需严格质控(如SDS-PAGE纯度检测)‌。

　　注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

　　小鼠单克隆抗体  必赢线路检测3003一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。必赢线路检测3003!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。必赢线路检测3003试剂盒