ELISA实验全流程解析：七步完成检测

　　ELISA实验全流程解析：七步完成检测

ELISA实验的核心步骤包括固相包被、样本孵育、信号放大及定量分析，以下是标准化操作流程：

1. ‌包被抗体/抗原‌

将捕获抗体或抗原(1-10 μg/mL)用碳酸盐缓冲液(pH 9.6)稀释，加入96孔板(100 μL/孔)，4℃过夜或37℃孵育2小时，使固相载体表面充分吸附‌。

2. ‌封闭非特异性位点‌

每孔加入200 μL封闭液(5% BSA或脱脂奶粉)，室温孵育1-2小时，减少后续非特异性结合‌。

3. ‌样本孵育‌

加入梯度稀释的样本或标准品(100 μL/孔)，室温孵育1-2小时，使目标抗原与包被抗体结合‌。

4. ‌检测抗体反应‌

加入酶标一抗(夹心法)或二抗(间接法)，室温孵育1小时，通过抗体-抗原特异性结合放大信号‌。

5. ‌洗涤‌

每孔用含吐温的PBS洗涤3-5次，去除未结合物质，降低背景干扰‌。

6. ‌底物显色‌

加入HRP底物(如TMB，100 μL/孔)，避光孵育15分钟，酶促反应产生蓝色产物‌。

7. ‌终止与检测‌

加入终止液(如2Mls，50 μL/孔)终止反应，15分钟内用酶标仪读取450nm吸光度值，通过标准曲线计算样本浓度‌。

关键注意事项

温育时间‌：避免过长导致非特异性结合增加;

洗涤质量‌：残留洗涤液会显著影响结果准确性;

显色控制‌：显色时间需统一，避免过度反应‌。

通过上述步骤，可完成从样本处理到定量分析的完整ELISA检测流程‌。

注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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