ELISA实验样本处理常见错误及解决方案

　　ELISA实验样本处理常见错误及解决方案

　　一、样本采集与保存错误

　　抗凝剂选择不当‌

　　错误：使用肝素钠抗凝血浆时未充分混匀，导致局部凝血或纤维蛋白析出。

　　解决：EDTA抗凝血浆需立即颠倒混匀5-8次，避免静置‌。

　　保存条件不规范‌

　　错误：血清/血浆反复冻融(>3次)或长期置于4℃未分装，导致蛋白降解。

　　解决：分装后-80℃保存，避免反复冻融;短期检测可2-8℃保存≤7天‌。

　　溶血或脂血样本未处理‌

　　错误：直接使用溶血样本(血红蛋白释放过氧化物酶干扰显色)或高脂血样本(非特异性吸附)。

　　解决：离心后取上清，溶血样本需稀释或超滤处理‌。

　　二、样本预处理错误

　　离心参数错误‌

　　错误：离心速度过低(<2000×g)或时间不足(<15分钟)，导致残留细胞碎片。

　　解决：3000×g离心20分钟，4℃操作‌。

　　稀释比例不当‌

　　错误：高浓度样本未预实验确定稀释倍数，超出检测线性范围。

　　解决：通过棋盘滴定法确定最佳稀释比例(如1:5至1:20)‌。

　　裂解液污染‌

　　错误：使用含RIPA或SDS的裂解液处理样本，残留去垢剂抑制酶活性。

　　解决：改用PBS或生理盐水匀浆，超滤去除小分子干扰物‌。

　　三、操作流程错误

　　加样交叉污染‌

　　错误：同一枪头重复吸取不同样本，导致假阳性。

　　解决：使用带滤芯枪头，每孔更换吸头‌。

　　样本未平衡至室温‌

　　错误：冷藏样本直接加样，导致反应速率不均。

　　解决：室温平衡30分钟后再检测‌。

　　防腐剂干扰‌

　　错误：样本含叠氮钠(抑制HRP酶活性)或硫柳汞(干扰抗原-抗体结合)。

　　解决：更换无防腐剂保存液或透析去除‌。

　　四、特殊样本处理问题

　　组织样本处理不当‌

　　错误：未充分匀浆或离心后上清含脂肪颗粒。

　　解决：加入蛋白酶抑制剂，4℃匀浆后12000×g离心10分钟‌。

　　尿液/脑脊液样本污染‌

　　错误：未过滤或离心去除细菌/颗粒物。

　　解决：0.22 μm滤膜过滤或高速离心(10000×g)‌。

　　细胞培养上清处理遗漏‌

　　错误：未去除细胞碎片或代谢产物(如乳酸)。

　　解决：离心后取上清，必要时超滤浓缩‌。

　　五、关键预防措施

　　标准化操作‌：严格记录样本处理时间、温度及离心参数‌。

　　质控样本‌：每批次实验加入已知浓度标准品验证线性范围‌。

　　设备校准‌：定期校验离心机转速及移液器精度‌。

　　注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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