ELISA测定原理及三种主要方法

　　ELISA测定原理及三种主要方法

　　ELISA(酶联免疫吸附测定)是一种基于抗原-抗体特异性结合的生物检测技术，通过酶标记物催化底物显色反应，实现对目标物质的定性与定量分析‌。其核心步骤包括：

　　固相包被‌：抗原或抗体吸附于聚苯乙烯微孔板表面。

　　特异性结合‌：待测样本中的目标分子与固相载体上的配体结合。

　　信号放大‌：酶标记的二抗或抗原催化底物显色，通过吸光度(OD值)定量‌。

　　三种主要ELISA方法

　　及特点

　　1. ‌直接ELISA‌

　　原理‌：抗原直接包被于固相载体，酶标记的一抗直接结合目标抗原‌。

　　优点‌：步骤简单(无需二抗)，避免交叉反应，适合高通量筛查‌。

　　应用‌：病原体检测(如流感病毒)、纯化蛋白定量‌。

　　2. ‌间接ELISA‌

　　原理‌：一抗先与抗原结合，酶标记的二抗再与一抗结合，信号放大5-10倍‌。

　　优点‌：灵敏度高，适用于抗体效价检测(如疫苗接种效果评估)‌。

　　应用‌：传染病诊断(HIV抗体筛查)、自身免疫病检测‌。

　　3. ‌夹心ELISA‌

　　原理‌：双抗体夹心结构(捕获抗体+检测抗体)，需抗原至少有两个表位‌。

　　优点‌：灵敏度高(pg/mL级)，抗干扰能力强，适合复杂样本‌。

　　应用‌：细胞因子检测(IL-6)、肿瘤标志物(CEA)、食品安全检测‌。

　　方法选择建议

　　直接ELISA‌：快速筛查，但灵敏度较低‌。

　　间接ELISA‌：需检测抗体时优先选择(如抗体制备筛选)‌。

　　夹心ELISA‌：复杂样本中微量蛋白检测的选择。

　　常见问题与优化

　　假阳性/阴性‌：可能因洗涤不充分或试剂污染导致，需严格质控‌。

　　标准曲线异常‌：检查抗原包被浓度或酶标物活性‌。

　　注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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