ELISA检测试剂盒的免疫测定类型

　　ELISA检测试剂盒的免疫测定类型

　　ELISA试剂盒的分类主要基于免疫测定的具体实验步骤和原理，特别是抗原、抗体和酶标记物的结合方式。以下是四种最核心、最常见的类型：

　　1. 直接法ELISA

　　原理：将待测抗原吸附在固相载体上，然后直接加入酶标记的一抗与之结合，最后加入底物显色。

　　流程：包被抗原 → 加入酶标一抗 → 洗涤 → 加入底物 → 检测

　　优点：操作简单、步骤少、时间短，无交叉反应。

　　缺点：信号放大作用弱，灵敏度相对较低;每一种待测物都需要特异的酶标一抗，成本高且不灵活。

　　应用：较少用于临床检测，多用于简单的抗原鉴定。

　　2. 间接法ELISA

　　原理：将待测抗原吸附在固相载体上，先加入未标记的一抗与之结合，再加入酶标记的二抗与一抗结合，最后加入底物显色。

　　流程：包被抗原 → 加入一抗 → 洗涤 → 加入酶标二抗 → 洗涤 → 加入底物 → 检测

　　优点：

　　信号放大：一个一抗可以结合多个酶标二抗，灵敏度高于直接法。

　　灵活性高：一种酶标二抗可用于多种不同的一抗(只要一抗来自同一种属)，成本低，通用性强。

　　缺点：步骤较多，可能出现非特异性交叉反应。

　　应用：最为常用，广泛应用于抗体(如自身抗体、病原体感染抗体)的检测。

　　3. 夹心法ELISA

　　这是检测抗原常用的格式，尤其是蛋白质类抗原。

　　原理：需要两种能同时结合抗原不同表位的抗体。先将一种抗体(捕获抗体)包被在固相载体上，捕获样品中的抗原，然后加入另一种抗体(检测抗体)与抗原的另一表位结合，形成“抗体-抗原-抗体"夹心结构。检测抗体可以是酶标的(直接夹心)，也可以通过酶标二抗来检测(间接夹心)。

　　流程：包被捕获抗体 → 加入样品(抗原)→ 洗涤 → 加入检测抗体 → 洗涤 → 加入酶标二抗(如为间接法)→ 洗涤 → 加入底物 → 检测

　　优点：

　　高灵敏度、高特异性：两次识别大大降低了交叉反应。

　　适用于复杂样品：抗原无需预先包被，可直接检测液体样本(如血清、细胞培养液)中的抗原。

　　缺点：需要配对良好的两种抗体，开发成本较高。

　　应用：细胞因子(如IL-6, TNF-α)、激素、肿瘤标志物等蛋白的定量检测。

　　4. 竞争法ELISA

　　主要用于检测小分子抗原(半抗原)，或者当抗原只有一个表位，无法使用夹心法时。

　　原理：样品中的待测抗原与已知量的酶标抗原竞争结合有的抗体。

　　方法A(更常见)：将特异性抗体包被在板上。同时加入样品(含未知抗原)和酶标抗原，两者竞争与固相抗体结合。洗涤后，结合的酶标抗原越多，显色越深，但样品中的抗原浓度与显色信号成反比。

　　方法B：将抗原包被在板上。样品中的待测抗原与酶标抗体预先孵育，然后加入板中，与固相抗原竞争结合酶标抗体。同样，信号与待测抗原浓度成反比。

　　优点：适用于小分子检测;抗体质要求不高。

　　缺点：灵敏度受竞争反应影响;数据解读与上述方法相反(负相关)。

　　应用：农药残留、兽药残留、小分子激素、检测。

　　总结对比表

　　类型检测目标主要特点灵敏度应用场景

　　直接法抗原一步法，酶标一抗低研究性抗原鉴定

　　间接法抗原/抗体使用酶标二抗，信号放大高常用，特别是抗体检测

　　夹心法抗原两种抗体，特异性强最高蛋白定量(细胞因子、标志物)

　　竞争法小分子抗原信号与浓度成反比中等小分子、半抗原检测(药物残留)

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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